尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應用于生物分析領域的工具,其工作原理主要基于分子大小差異進行分離。利用柱內固定相中孔隙與分子間的物理作用來實現分離。具體來說,聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選,較大的分子無法通過尺寸較小的孔道,只有較小的分子才能通過這些孔道,從而實現不同分子尺寸的分離。其優點在于其分離速度快、操作簡單、分離效果好。此外,該技術不依賴于分子之間的親和性或化學性質,因此適用于各種生物大分子,如蛋白質、多肽和核酸等的分離。
1、分離純化:能夠根據分子的大小差異進行分離,廣泛應用于蛋白質、核酸、多糖等生物大分子的分離純化。例如,在蛋白質分離純化過程中,通過尺寸排阻色譜柱可以將不同大小的蛋白質分子分離開來,從而實現目標蛋白的純化。
2、分子量測定:利用尺寸排阻色譜柱可以對蛋白質、聚合物等分子的分子量進行測定。通過將已知分子量的樣品注入色譜柱,根據其洗脫時間與保留時間的關系繪制校正曲線,進而可以確定未知樣品的分子量。
3、聚集體分析:在藥物研發和質量控制中,可用于分析蛋白質、抗體等生物制品中的聚集體情況。通過對聚集體的分析,可以評估生物制品的穩定性和安全性。
4、結構表征:當尺寸排阻色譜柱與其他檢測技術(如光散射、粘度計等)相結合時,可以提供關于大分子結構、構象、聚集以及支化等方面的信息。這對于研究生物大分子的結構特征和功能具有重要意義。
5、樣品凈化:還可以用于去除樣品中的鹽分、小分子雜質等,實現樣品的凈化。這在生物制藥領域尤為重要,因為高純度的樣品對于后續的研究和應用至關重要。
6、濃縮和脫鹽:由于尺寸排阻色譜柱的工作原理基于分子大小的差異,因此它也可以實現樣品的濃縮和脫鹽處理。這對于需要進一步分析和研究的樣品來說非常有用。