技術文章
除非另有說明,反相柱應始終使用至少 5% 的有機改性劑。在 95% 到 100% 的水溶液條件下,色譜柱可能會發生去濕/相塌陷,這意味著流動相會由于表面張力而從多孔系統中排出。該問題通常發生在流停止時。如果色譜柱已去濕,則可以通過泵送 10 到 20 個柱體積的純甲醇/乙腈或含有至少 50% 有機改性劑的流動相來恢復它,但不能保證它會起作用。這種現象在 C18 和 C8 色譜柱中極為常見,其他反相色譜柱也應避免這種現象,以確保色譜的穩定性。
事實上,C8 和 C18 鏈形成了一個非常疏水的層,所以當流動相的有機含量低于 5% 時,它的表面張力會增加到流動相不能再潤濕孔隙內部的程度,并且顯然表現為分析物保留的可逆損失。 具有低碳載量( 反相 HPLC 色譜柱 C6、C4、苯基、PFP 等另一方面)始終能夠耐受較低濃度的有機物而不會發生任何保留偏移。
由于傳統的 C18 HPLC 色譜柱在這些高含水條件下表現不佳,現在市場上有一類新型 RP-AQ 固定相,在這些惡劣條件下表現出不變的性能。它們的多功能性證明它們是常規 HPLC 分析以及 100% 水溶液條件下極性樣品分析的理想選擇。